液相实验室操作要点及注意事项

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液相实验室操作要点及注意事项

1. 液相色谱仪应臵于稳定的工作台上，避免震动、阳光直射和气流。环境温度为10-30℃(应恒定)，相对湿度25%-75%。电源电压220±20V。应保持仪器放臵房间的清洁、卫生，每天打扫房间、擦洗操作台和仪器外壁。

液相实验室操作要点及注意事项

2. 流动相使用前必须经过0.45m的滤膜，有机相的流动相必须为色谱纯，水相必须为新鲜制备的纯化水，并规定使用有效期，以防止长菌或长藻类。

3. Agilent HPLC色谱仪用于清洗用的10%异丙醇每15天更换一次，Waters HPLC色谱仪用于清洗密封垫和进样针的10%甲醇每15天更换一次。

4. 色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（如ACN适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。

5. 对于手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。

6. AgilentHPLC色谱仪每3个月或当玻璃滤头发黑时，用30%硝酸浸泡玻璃滤头30min(禁止超声) ， WatersHPLC色谱仪每3个月用纯化水超声金属滤头30min。

7. Agilent HPLC色谱仪使用5ml/min的流速排气时，如果压力大于10bar，更换过滤用白色滤头; Waters HPLC色谱仪应定期（说明）清洗在线过滤器。

8. 紫外检测器的氘灯有一定的寿命，进样前一小时左右打开即可。实验完成冲洗柱子时即关闭以延长使用时间。每3个月用色谱纯的异丙醇（或甲醇）冲洗检测池。

9. 仪器如较长时间不用应使高效液相色谱仪处于所有电源开启、检测器紫外灯关闭的待机状态，不能频繁的开启/关闭电源。

10. 发现泵漏液、紫外灯能量不足或损坏、仪器无法启动等等较严重的情况，应报告室主任，室主任安排进行检查，维修，并做好记录。

11. 进入计算机上的色谱工作站应设臵密码。如工作站上不能设臵密码，则应在装有该色谱工作站的计算机上设臵密码，防止未经许可授权的人员进入该工作站系统。

12. 应设臵计算机屏幕保护的密码，间隔时间不大于15分钟，防止在操作者离开计算机较长一段时间时，其他人员进入工作站。所有的密码应由室主任做统计并报上级领导备案。

13. 操作人员应正确运用工作站，不得对计算机系统时间等基础信息进行改动，保证采集到的数据原始真实、完整规范。

14. 可根据需要选择工作站提供的图谱打印格式打印图谱，但必须保证图谱所有信息的完整性，不得对页眉、页脚的内容进行删减。

15. 色谱图的图谱号必须保证唯一性；样品命名必须细致详尽。每张图谱上应记录检验人和复核人以及时间。

16. 电脑中的检验原始图谱每半年至少备份一次，用硬盘或光盘归档保存。所得数据硬盘或光盘由QC按检验记录的管理规定中相关规定进行保存。

17. 个人实验台面及使用的试剂等都应做好标识，以防混淆，以便偏差的调查。

18. 数据应在第一时间记录，保证真实可靠。

19. 氯仿,四氯化碳,甲醇以及苯等高危溶剂,或者盐酸等强刺激性气体使用时候注意排气通风。

20. 硫酸,硝酸等氧化性酸,注意使用安全,如果不小心滴在身上,应立即使用水清洗,然后用碳酸氢钠液洗涤,不要因为浓度很低而忽视,因为随着水份的蒸发,硫酸的浓度增高,而会使得原来的稀硫酸同样变成浓硫酸。

21. 所有有机的废液都要放入废液缸,禁止倒入下水道,造成环境污染.所有的高浓度无机废液,包括酸碱以及所有的有毒废液,比如砷试剂都严禁倒入下水道。

22. 使用量筒、移液管、滴定管移取一定液体，在读数时，应该使视线刻度与液体凹面最低点的切线处于同一平面上。

23. C18色谱柱在使用完后，应先用水相（10%甲醇）冲洗较长时间

（约1h），再使用有机相（90%甲醇）冲洗30min后密封保存。其他类型的色谱柱应按相应的要求冲洗，保存。

24. 色谱仪在使用完后，应用大量水相冲洗管路，以防止系统残留的缓冲盐等析出，堵塞管路。

25. 色谱柱安装时应尽量减少死体积，以免影响分离效果。

26. 自动进样器的针座应定期拆下清洗，避免影响下一次试验。

27. 色谱仪应防止流动相抽干。泵需设定压力上限（15-20Mpa）和压力下限（0.5-1Mpa），若不小心抽干应使用过滤脱气后的甲醇冲洗，以排去系统中的气体。

28. 在切换使用含缓冲盐的流动相时，为防止盐类析出，应先用水相（10%甲醇）过渡。

29. 流速升高或降低时，应逐步完成。

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30. 容量瓶等应认真清洗，根据使用的样品类型，选择相应的清洗试剂，放臵在相应的位臵，以免混淆。

31. 实验室内的电器应定期检查，防止漏电等事故。

32. 保证电子天平的使用环境符合相应的要求：电子天平工作条件:温度15~25℃，相对湿度 <75%，电源电压220±20V。

33. 本仪器应在正常的照明、室温和湿度条件下使用，防止在高温高湿的条件下使用，避免经常接触腐蚀性气体，否则将影响使用寿命，承放本仪器的基座或工作台应牢固稳定，并基本水平。

34. 电子天平在每次接通电源后应预热三十分钟后方可开启显示器进行称量。使用前应调节天平水平钮,使天平水泡位于水平仪中心。

35. 做好天平内、外部卫生保养工作，每次称量避免落到称台上物体，如不慎落上应立即用毛刷刷净。

36. 电子天平使用前应先按相应的SOP校验，并根据称量的范围选择合理的校验范围。

37. 保持天平内部清洁，关机后，拆下天平托盘，用小棒缠上脱脂棉花蘸少量无水乙醇或醋酸丁脂轻轻揩擦托盘。

38. 称量时应注意不能超过天平的最大载荷。天平搬动时，必须将称盘，灯罩、变压器等零部件小心取下，放入专用包装盒内，其他零件不得随意拆卸。

39. 称样完成后如果药勺上有剩余或残留样品，不能倒回，应舍弃。

40. 天平应按计量部门规定定期检定，并有专人负责维护保养。如果使用过程中发现异常情况，根据所出现情况及时做好相应的维护与保养记录。

41. 每天应擦拭冰箱表面以使其保持清洁。

42. 每天观察冰箱表面的“温显”窗口所显示的温度，依据温度调节说明书调节温度使其在所需要的温度范围内。

43. 冷柜一旦切断电源，需待五分钟方可重新接通，以免压缩机或系统损坏。维护保养，必须拔下电源插头。

44. 注意观察冰箱壁上是否结有冰层，如有冰层应轻轻铲除，以保证良好制冷效果。

45. 超声仪严禁空载状态下开机，开机前必须按使用说明的液位将清洗倒入清洗槽内。清洗机工作时，不要将手指浸入清洗液中。

戴安液相操作注意事项2017-03-16 22:37 | #2楼

1 分析样品前的准备工作

1．检查流动相是否太少或放置太久。超纯水或缓冲盐溶液建议每天必需更换

2.梯度洗脱则有机相用一个通道（如A通道），超纯水或缓冲盐用另一个通道（如B通道），使用一段时间建议A和B通道进行更换。

3. 混合流动相的过滤原则：纯有机相或含一定比例有机相的就要用有机系0.45μm的滤膜，水相或缓冲盐的就要用水系0.45μm滤膜。这一点需特别注意,因有机溶剂可以溶解水系滤膜,被溶解的水系滤膜更易损坏密封圈和柱塞杆。

4. 配好的流动相真空过滤时，当抽滤完后可继续抽滤几分钟，起到抽滤脱气的作用。建议超声波中的水位尽量高于流动相瓶中的水位，超声脱气效果会更佳。超声的时间不易过长，超声波工作会发热，超声时间过久时，超声波中的水会发热，随之流动相也发热升温，导致改变流动相的组成比例。

5. 分析样品前先用甲醇或乙腈冲洗流路约20分钟，平衡活化色谱柱，并赶走管路中的杂质和水分。

6. 若流动相为有机相与水相的混合物，按照分析样品的需要调节比例阀的比例后冲洗流路约30分钟后，待基线走平后即可进样。

7. 若流相相中含有缓冲盐溶液、有机/无机酸或其它电解质，用95%左右的去离子水冲洗流路约20分钟后，再按照分析样品的需要调节比例阀的比例后冲洗流路约30分钟后，待基线走平后即可进样。

9. 首先将所需要使用的流动相通道分别在软件泵的控制面板中进行“冲洗”排气泡，详细说明参考前面讲到过的泵的控制面板。

10. 若为手动进样阀，则需将进样阀处的扳手反时针扳到头后，用一次性医用注射器吸几毫升的50%甲醇或流动相，从进样口注入，清洗定量环和管路。

11. 若为自动进样器，则需按软件中自动进样器面板上三个清洗的“启动”键洗针并排掉注射器和进样针中残留的气泡。若仪器长时间未用，可能按一次“启动”键无法排气泡，可再按“启动”键，直至气泡排完为止。

12．若仪器较长时间未使用，流通池中可能有气泡，可以不接色谱柱，加大流速冲洗流通池中的气泡。

2仪器清洗

每天或每次使用仪器分析样品前，需先清洗泵头或管路中残留的气泡或溶剂。在使用此键前需先向上掀开泵头前面板，然后拧松快速清洗阀（反时针两圈左右）。然后在软件中按此 “冲洗”键，泵将以3.0 ml/min的速度自动快速清洗泵内残留的气泡，5分钟将自动停止。若想手动停止，只要再按“冲洗”键，将停止清洗。

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注意：若长时间未使用仪器，或该通道更换了另外的流动相，清洗时间不易太短，一般以5分钟为宜。否则，有残留气泡或溶剂留在真空脱气机内，易造成流速不稳定，所分析成分的保留时间不稳定而影响正常的分析。

要使用的每个通道（A/B/C/D）都需要设100%A,B,C,D单独快速清洗来排气泡。如果通过分别设定每个通道的比例让多通道进行同时快速清洗，泵流速建议控制在3ml/min以下，否则容易损坏比例阀。

清洗有缓冲盐的那个通道前后，一定要用去离子水清洗管路和泵头。以防止缓冲盐直接与纯有机相（甲醇、乙腈等）混合而产生结晶堵塞比例阀。

清洗完毕，先停泵，再拧紧快速清洗阀。切记：不要在泵未停止清洗前拧紧快速清洗阀。

若流相相中含有缓冲盐溶液、有机/无机酸或其它电解质，用95%左右的去离子水冲洗流路约20分钟后，再按照分析样品的需要调节比例阀的比例后冲洗流路约30分钟后，待基线走平后即可进样。

将所需要使用的流动相通道分别在软件泵的控制面板中进行“冲洗”排气泡。若为手动进样阀，则需将进样阀处的扳手反时针扳到头后，用一次性医用注射器吸几毫升的50%甲醇或流动相，从进样口注入，清洗定量环和管路。若为自动进样器，则需按软件中自动进样器面板上三个清洗的“启动”键洗针并排掉注射器和进样针中残留的气泡。若仪器长时间未用，可能按一次“启动”键无法排气泡，可再按“启动”键，直至气泡排完为止。

若仪器较长时间未使用，流通池中可能有气泡，可以不接色谱柱，加大流速冲洗流通池中的气泡。

建议在开泵稳定5分钟以后再开紫外检测器的灯。开灯后，检测器会自动进行波长校正和能量校正。仪器若长期未使用，则检测器中可能有残留的气泡存在，这样，紫外光透过率就会降低，检测到的灯的能量也很不稳定，造成漂移和噪音值较大，自检就无法通过。所以，需开泵稳定几分种，赶走流通池中的气泡之后再开检测器较好。

3 监视基线

点工具栏中的“监视基线”或左下角的“采集打开”，开始设置采集基线。将跳出如下窗口，选择UV：

4 分析完样品后的维护

1 流路的清洗

1．若当天不再使用仪器，可以将检测器的灯设定为off。若当天还需要继续使用仪器，建议不要关闭检测器的灯。

2. 若流动相为有机相与水相的混合物，则直接用100%甲醇或乙腈冲洗流路约30分钟后，待基线走平且无杂质峰出现后即停泵关机。

3. 若流相相中含有缓冲盐溶液、有机/无机酸或其它电解质，则先用95%的去离子水充分清洗柱子，再用有机相清洗保存，详细步骤参照仪器控制面板2.4.1中清洗程序操作，待基线走平且无杂质峰出现后即停泵关机。

4. 建议不要在停泵后仍长时间的开着检测器的灯，以免造成流通池中液体挥干而污染流通池。若不关机不关灯，建议使用低流速(0.1或http://www.ahsrst.cn)。 5，如果流动相中含有缓冲盐或酸，则需先用水相（含5-10%的有机相）冲洗色谱柱20倍柱体积以上（常规流速40分钟以上），再用有机相冲洗色谱柱。如下图，为一个含有缓冲盐仪器方法结束后的冲洗过程。

说明：尽量避免直接用50%甲醇冲洗色谱柱。

2 样品瓶的清洗

若使用的是自动进样器，则每次进样后用过的样品瓶需要清洗，以方便重复使用。一般可将几次使用过的样品瓶累积起来，用去离子水（少许甲醇）加洗洁精超声30～60分钟后，用去离子多次清洗干净后，干燥箱中干燥即可。样品盖最好一般不要放在干燥箱中高温干燥，容易变形（可以将样品盖放蒸发皿中，再将蒸发皿放在干燥箱的顶盖上，烘干的余热可将样品盖烘干。）。

3 洗针

1. 若为手动进样阀，则需将进样阀处的扳手反时针扳到头后，用一次性医用注射器吸几毫升的50%甲醇，从进样口注入，清洗定量环和管路。

2. 若为自动进样器，则需先在软件进样器面板上分别依次启动三个清冼键。特别是比较粘稠的样品（如中药等），每天做完样后一定要洗针。

.4 关机

系统清洗好后，如果多日不再使用仪器和电脑,可关闭检测器的紫外灯和可见光灯，将泵的流速降为0。然后关闭电脑，最后关闭仪器各部件的电源;如果第二天还要分析样品,建议不关紫外灯和可见光灯,以http://www.ahsrst.cn低流速平衡仪器. 若分析的样品较多，且配置有自动进样器，可设定一个冲洗柱子和关机程序，等仪器分析完样品后，自动清洗色谱柱，并关灯停泵（说明：在泵的控制面板

2.4.1部份有详细说明）。

智能关机注意事项

1，智能关机不适用于含有缓冲盐或酸体系在运行完序列后直接执行，需另外冲洗序列。

2，如果分析用流动相是水/甲醇体系，清洗就用水和甲醇，如果分析用水/乙腈体系，建议仍用水和乙腈清洗，因为甲醇的粘度系数较高，洗脱强度又弱于乙腈。 5 日常维护及注意事项

1 泵

1. 放置了一天或以上的水相或含水相的流动相如需再用，需用微孔滤膜重新过滤。

2. 蠕动泵清洗瓶中的95%的水/甲醇或异丙醇要求每天更换。若液相使用频率不高，建议每天使用前更换，以免水长细菌损坏泵中各组件。

3. 为了保证U3000泵的安全运行，必须设定高、低压极限（一般安装以设置好）；

4. 流动相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亚甲基氯、四氢呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等，以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。若需要使用正相系统分析样品，需要另行安装耐腐蚀的正相密封圈。

5. 拧松快速清洗阀时，不宜拧得过松。一般拧松2圈左右即可。拧得过松流动相容易从清洗阀部位流进泵头中引起报警。

6. 使用快速清洗阀时，只能逐个通道的排气泡，不得将几个通道同时按比例排气泡，比例阀的快速切换易导致损坏。

7. 流动相一定要过滤和超声脱气。

8. 详细操作及注意事项可参考泵的硬件说明书。

2 手动进样阀或自动进样器

1. 手动进样阀每天做完样后，一定要用甲醇冲洗定量环中的杂质。若样品为水

系，则先用去离子冲洗定量环再用甲醇冲洗。

2. 手动进样阀一定要注意不要使用不规范的过长的平头针头或普通的尖锐的针头，易扎破六通阀中的垫片而导致漏液、进样不准确。

3. 自动进样器建议用水和有机溶剂混合的不含盐的溶液进行洗针，不要使用缓冲盐。

4．样品必须要使用相应的微孔滤膜过滤，以免堵塞进样器的针头或色谱柱。

5．样品瓶放置在自动进样器的托盘之后，要检查瓶子是否未放稳或放歪，以免进样时将针头扎弯或变形。

6. 每天洗针前要更换相应的流动相或洗液。

7．尽量不要手动转动进样器的托盘，需要放置样品或转动样品盘前请使用进样器前面板的磁性笔触控屏幕或在软件中使用移动盘或瓶到前面来转动样品盘。

8.重复使用样品盖时，请将含硅胶的一面朝下，以免硅胶粒堵塞进样针。如何确认哪一面是硅胶可以参考相应的样品盖描述或说明书。

9．其它使用和注意事项请考考进样器的硬件说明书。

3 柱温箱

1. 柱温箱一旦发生报警，一定要及时找到原因。若实验室湿度太高，则需采取相应的除湿措施。若柱温箱中发生漏液现象，则需及时拧紧色谱柱并擦干漏液，长时间的漏液极易损坏柱温箱中的传感器。

2. 若实验中使用了缓冲盐或其它电解质，在做完实验后，系统和色谱柱一定要充分清洗。

3．柱温箱使用温控过程中，尽量不要打开前门，否则传感器会报警出故障。

4．柱温箱的废液管尽量不要与其它各部件的废液管共用，避免造成湿度过高而报警。另外，废液管一定不要有向上拐弯的部份，否则废液或冷凝水会倒流。

5．尽量避免在低流速下设定较高温度，易造成色谱柱的塌陷或老化。

6．主机的两测尽量不要长时间放置挥发性的液体，以免造成柱温箱传感器报警。

7. 配有阀切换装置的，在切换系统或切换阀之后要注意前一系统的影响。可以设定约3分钟的平衡时间来完全消除（反相柱）。

4 检测器

1. 检测器的紫外或可见灯在长期打开的情况下，一定要保证有溶液流经检测池。若不需要做样，可设置一个较低的流速（如http://www.ahsrst.cn），不再使用仪器可关闭灯的电源。

2. 检测器的灯一般是在流通池有溶液连续流动几分钟后才开的。如果流动池中有气泡，则会提示漂移过大无法通过自检和校正。

3. 检测器的氘灯或钨灯不要经常开关，每开关一次灯的寿命会损失几十小时。

4. 连续两次开关灯之间应至少间隔15分钟。否则灯过热易

导致烧坏。

5. 流动相中有缓冲盐或酸碱时，样品分析完后一定要清洗流通池，以防止流通

池污染或堵塞。

6. 检测器需尽量避免震动，需搬动时，一定要采取有效的防震措施。 7. 对于VWD紫外检测器，尽量避免长时间使用多波长同时检测。

8. 对于CAD检测器，在开泵前或停泵时保证流路的气源是打开的。 5 其它

1. 缓冲溶液与有机溶剂互相转换前一定要用95%的去离子水清洗泵，防止盐在有机相中结晶损坏泵中各组件和堵塞色谱柱。

2. 仪器使用前后一定要用甲醇或乙腈冲洗流路，平衡活化色谱柱，赶走管路中的杂质和水分。

3. 缓冲溶液的浓度不能高于1.0 mol/L，pH范围2～12（使用c18柱子时，pH范围2～7）。

4. 仪器长时间不用，每个泵通道和整个流路一定要用甲醇冲洗后保存，以免结晶或造成污染。

5. 各部分电源关机后再开间隔时间不易过短，应至少15秒钟，检测器至少15分钟。

6. 采集紫外信号时，若分析物质的最大波长已知，则尽量减少采集的通道个数，以免占用电脑的空间（PDA-100检测器）或影响光栅的寿命（VWD-3400检测器）。

7. 每次分析时间不易过短，建议至少30分钟。

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